Pikogreen dsDNA定量試劑盒 (超敏)

產(chǎn)品描述
　　Pikogreen dsDNA 定量試劑盒（Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit）不同于常規(guī)的基于吸光度的測(cè)量，這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA、ssDNA或RNA，有選擇性地檢測(cè)dsDNA（見(jiàn)圖1）。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比，該產(chǎn)品具有檢測(cè)范圍廣、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)。試劑盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三個(gè)組分，可以在200 uL體系內(nèi)定量0.2~100 ng的dsDNA（見(jiàn)圖2）。此外，試劑盒還可以將其他污染物的影響降低至最小，可以耐受常規(guī)污染物例如蛋白質(zhì)，鹽，有機(jī)溶劑和洗滌劑等（見(jiàn)表1），本試劑盒不具有細(xì)胞膜通透性，沒(méi)有細(xì)胞毒性和誘發(fā)突變性，對(duì)人體安全無(wú)害。
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產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法

1. 使用前，將產(chǎn)品從儲(chǔ)存條件下取出恢復(fù)至室溫。如果100XEnchancer儲(chǔ)存液出現(xiàn)沉淀，可37℃水浴溶解。每個(gè)組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心，以免造成不必要的試劑損耗。

2. 每個(gè)待測(cè)樣品對(duì)應(yīng)200 μL的Pikogreen工作液。對(duì)于一個(gè)96孔板，吸取200 μL 100X Enchancer，加入到20 mL Quantitation Solution 中，渦旋混勻，配置成Pikogreen工作液，為得到最佳結(jié)果，工作液應(yīng)在1 h內(nèi)使用完畢。如果將工作液重新儲(chǔ)存并在24 h內(nèi)使用，結(jié)果的準(zhǔn)確性會(huì)有輕微損失。儲(chǔ)存過(guò)程中，增強(qiáng)液可能會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，可以通過(guò)渦旋震蕩使其重懸。

3. 對(duì)于每個(gè)樣品，吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果精確可靠，建議每個(gè)測(cè)試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個(gè)復(fù)孔，此過(guò)程也可以使用有精確量程的移液排槍進(jìn)行。黑色的檢測(cè)板可以減少各測(cè)試樣品間的熒光干擾。

4. 在96孔板微孔中，每孔加入10 μL的dsDNA標(biāo)樣或未知樣品，并用移液器輕輕混勻。

5. 將微孔板室溫避光孵育5~10 min，為得到最佳結(jié)果，孵育結(jié)束后，應(yīng)立即讀取檢測(cè)板。也可以在6 h內(nèi)讀取數(shù)據(jù)，但結(jié)果的精確性會(huì)有輕微損失。

6. 使用激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)在485 nm和530 nm處的酶標(biāo)儀測(cè)量熒光值。

7. 制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算檢測(cè)樣品的DNA濃度（見(jiàn)圖2）。
   【注】：圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)僅供參考，您可以根據(jù)實(shí)際測(cè)得的數(shù)據(jù)自制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，從而求算樣品的濃度。

注意事項(xiàng)

1. 對(duì)于要檢測(cè)的植物或動(dòng)物來(lái)源的DNA樣本，小牛胸腺DNA（Calf thymus DNA ）常常作為制作DNA標(biāo)樣的參照物。因?yàn)?/span>Calf thymus DNA具有雙鏈結(jié)構(gòu)、高度聚合，堿基分配均勻（AT含量58%，GC42%）。如果檢測(cè)樣品的熒光值超過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，那么需要將樣品做進(jìn)一步稀釋處理。為了保持結(jié)果的一致性，務(wù)必使每孔上樣量均等，且不含有其他高濃度的污染物。
   2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測(cè)量范圍在0.2~100 ng的dsDNA。對(duì)于一些不需要線(xiàn)性檢測(cè)的樣品，試劑盒檢測(cè)范圍可以擴(kuò)展至200 ng。如需檢測(cè)更低含量的樣品，您可以將DNA標(biāo)樣用1×TE緩沖液作進(jìn)一步的稀釋?zhuān)瑵舛瓤梢韵♂尩?.02 ng/μL，然后按照常規(guī)程序每孔10 μL上樣。
   3. 對(duì)于不同種類(lèi)的檢測(cè)儀器，您可以?xún)?yōu)化儀器設(shè)置，以獲取最佳線(xiàn)性度。一些可能會(huì)影響最終線(xiàn)性度和相對(duì)熒光強(qiáng)度的因素有：（1）激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)與帶寬（2）截止型濾波器（3）靈敏度設(shè)置（4）移液的準(zhǔn)確性（5）微孔板制造商。為了得到最佳結(jié)果，請(qǐng)使用精確校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測(cè)板。建議檢測(cè)時(shí)每個(gè)DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個(gè)復(fù)孔。如果檢測(cè)時(shí)不只一塊96孔板，建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，盡量減少檢測(cè)板之間的誤差。
   表1：常見(jiàn)的DNA污染物對(duì) Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響

【注】：3份dsDNA平行樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，分別在上述含有特定濃度污染物的條件下（初始濃度進(jìn)行檢測(cè)，“Pass"指與沒(méi)有污染物的體系相比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果變化范圍<20%。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標(biāo)儀在485 nm處激發(fā)，在530 nm處測(cè)熒光強(qiáng)度。“Pass *"指由此條件測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)有少許變動(dòng)。“dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。